Tha an synthesis searbhag niuclasach air a dhèanamh a’ cleachdadh an dòigh cruaidh ìre sialic amide triglyceride, far a bheil deireadh 3 ′ den DNA air a ghluasad air substrate ìre cruaidh agus thèid nucleotides a chuir ris anns an stiùireadh 3 ′ gu 5 ′ gus an tèid am criomag DNA a tha thu ag iarraidh a cho-chur. .Tha seo eadar-dhealaichte bho synthesis DNA le bhith a’ cleachdadh DNA polymerase.
Tha deireadh 3 ′ a ’chiad bhunait air a ghluasad air CPG rè synthesis, tha an 5 ′-OH den ath bhunait air a dhìon le di-p-tolyl trityl DMT, tha am buidheann amino air a’ bhunait air a dhìon le searbhag benzoic agus an 3 ′ -OH an uairsin air a ghnìomhachadh le todhar amino phosphate.Bidh bonn 1 den bhonn 5 5 ′-OH de 1 bonn agus 3 ′-OH den ath bhunait a’ cruthachadh triglyceride fosphite, a tha an uairsin air a oxidachadh le iodine gu triglyceride fosfáit, tha an dìonadair air an dàrna bonn 5′-OH air a thoirt air falbh le cuir a-steach cearcallan DM searbhag dichloroacetic tro bhith a’ cur ris an ath bhunait, agus às deidh synthesis tha an dìonadair air an 5 ′-OH air a thoirt air falbh le searbhag lag Tha am criomag air a dhì-cheangal bhon roisinn chruaidh le ammonium hydroxide tiugh, thèid an dìonadair a thoirt air falbh bhon bhunait le ammonium hydroxide dùmhail fo theasachadh, thèid an ammonium hydroxide a thoirt air falbh, tha a’ chriomag air a thiormachadh gu falamh, agus tha an searbhag niuclasach air a ghlanadh le cromatagrafaidheachd liùlach no DUILLEAG.
Ceumannan de Oligo Synthesis
Deblocking
Tha anTha buidheann dìon 5 deireadh DMT air a thoirt air falbh le bhith a’ cur fuasgladh TCA ris.
Gnìomhachadh
A’ measgachadh an gnìomhaiche leis a’ mhonaimear oligonucleotide gus am monomer gnìomhach oligonucleotide a chruthachadh.
Càraid
Bidh a’ bhuidheann hydroxyl 5-terminal ag ath-fhreagairt leis an eadar-mheadhanach oligonucleotide gnìomhach ann an ath-bhualadh dùmhlachd an-aghaidh ginealach gus ceangal triglyceride phosphite neo-sheasmhach a chruthachadh.
Caipeadh
Bidh cuir a-steach àidseant capaidh a’ coileanadh ath-bhualadh capaidh acetylation le cus bhuidhnean hydroxyl nach eil an sàs anns an ath-bhualadh dùmhlachd.
Ocsaideanachadh
Bidh cuir a-steach fuasgladh iodine anns a bheil uisge ag ath-fhreagairt le bannan fosphite neo-sheasmhach tro oxidation gus bannan triglyceride searbhag fosphoric seasmhach a chruthachadh.
Cleavage Cyanoethyl
An toradh searbhag niuclasach às deidh synthesis, le fuasgladh DEA a bharrachd gus am buidheann cyanoethyl a thoirt air falbh bhon cheangal phosphate triglyceride.
Glanadh & Dìon
Tha na mìrean searbhag niuclasach air an glanadh bhon ghiùlan ìre chruaidh le bhith a’ cur a-steach fuasgladh ammonium hydroxide dùmhail agus an uairsin air a theasachadh gus na buidhnean dìon a thoirt air falbh bho bannan hydrogen nam bunaitean.
Ùine puist: Samhain-21-2022