Tha bun-phrionnsabal DNA synthesis

Tha an synthesis DNA ceimigeach stèidhichte air an ro-innleachd synthesis ìre cruaidh agus ceimigeachd phosphoramidite.Eadar-dhealaichte bho synthesis DNA bith-eòlasach, is e an stuth ann an synthesis DNA ceimigeach DMT (4, 4-dimethoxytrityl) agus deoxyriboxyside atharraichte phosphoramidite, mar a chithear ann am Figear 1. Tha an synthesis DNA air a dhèanamh air an taic chruaidh (is urrainn dhuinn grunn deColbh Synthesis Oligo), ie CPG (glainne pore fo smachd) agus PS (polystyrene), agus tha an synthesis gu lèir air a dhèanamh air asynthesizer DNA/RNA, a tha na phrìomh uidheamachd againn, le modail eadar-dhealaichte leithid: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 agus msaa, tha an stiùireadh synthesis bho 3’ gu 5 ’, agus tha nucleotide air a thoirt a-steach don taic chruaidh tro aon cearcall synthesis.Mar as trice bidh cearcall synthesis a’ toirt a-steach ceithir ceumannan, Dì-dhìon, Coupling, Capping agus Oxidation (Figear 2).Tha an Deprotection air a shuidheachadh gus am buidheann DMT a thoirt air falbh air an taic chruaidh no am buidheann 5 'hydroxyl air an nucleoside roimhe, tha an searbhag trichloroacetic 3% ann an dichloromethane air a chleachdadh mar an ath-dhìon dìon.An uairsin chaidh cead a thoirt don phosphoramidite atharraichte deoxyriboxyside buidheann hydroxyl a nochdadh le cuideachadh bho activator, ie 5-ethylthiotetrazole no 4, 5-dicyanoimidazole, a ’cruthachadh am phosphitetriester (III), agus thuig iad an ceum Coupling.Thathas a’ dèanamh ceum Capping gus casg a chuir air a’ bhuidheann hydroxyl neo-ghnìomhach rè ceum ceangail, gus cruthachadh sreathan de lochdan neo-mhiannach a lughdachadh.Mu dheireadh, tha am fosphitetriester neo-sheasmhach (III) air a oxidachadh gu fosphortriester seasmhach ceimigeach (V) le iodine mar oxidant anns an latha an-diugh de pyridine.

Dh’ fhaodadh an DNA synthesized a bhith air a sgaradh bhon taic chruaidh le aminolysis, tha am buidheann dìon 2-cyanoethyl air an phosphortriester agus amide air an nucleobase air a sgoltadh aig an aon àm, tha na Plataichean Synthesis agus Colbhan Synthesis ann an racaichean air an cur gu dìreach anns an t-seòmar freagairt. De naUidheam Dìon.Dh’ fhaodadh DNA amh a bhith air ullachadh le HPLC, electrophoresis agus OPC air iarrtas, is urrainn dhuinn cuideachd anUidheam glanaidhairson post-giollachd.